Logo de l'E.N.T. Alsace
Thèses électroniques Service Commun de la documentation
Logo de l'Université de Strasbourg
Thèses et Mémoire de l'Université de Strasbourg

Sélection d'aminopeptidases de Streptomyces griseus par des gouttelettes microfluidiques

VAN DITMARSCH, Dave (2009) Sélection d'aminopeptidases de Streptomyces griseus par des gouttelettes microfluidiques. Thèses de doctorat, Université de Strasbourg.

Plein texte disponible en tant que :

PDF - Un observateur de PDF est nécessaire, comme par exemple GSview, Xpdf or Adobe Acrobat Reader
78756 Kb

Résumé

L’aminopeptidase de streptomyces griseus (SGAP; numéro de l’enzyme commission 3.4.11.10) peut catalyser plusieurs réactions: elle est (i) une aminopeptidase non-spécifique, (ii) une diesterase de phosphate et (iii) une oxidase de catéchol. supposée d’être un intermédiaire évolutif, elle peut être utilisée pour caractériser des voies d’évolution. le tri activé par la fluorescence des gouttelettes (FADS) pourrait être utilisé comme outil pour faire de l’évolution dirigée de la SGAP. Ce projet décrit le développement d’un système d’expression bactérien pour la SGAP, d’un test fluorogénique pour l’activité peptidase de la SGAP ainsi que son utilisation dans une sélection microfluidique. le facteur d’enrichissement expérimental (28.9) est proche du maximum théorique (110.5). Ensuite, la sgap a été fusionnée avec mcherry---une protéine fluorescente dans les longueurs d’onde rouge---afin de normaliser pour le niveau d’expression de la SGAP. une correlation de R2 = 1.00 a été trouvée entre l’activité de la SGAP et la fluorescence de mcherry. mais il n’était pas possible de détecter la mcherry en microfluidique dû au montage optique. Pour caractériser des voies d’évolution, il faut pouvoir trier pour deux activités simultanément. à cet effet l’acide 7-aminocoumarine-4-méthanesulfonique a été synthétisée comme composante des nouveaux substrats fluorogéniques. Enfin, comme projet parallèle, de la transcription et traduction in vitro de lacz dans des émulsions 2d a démontré que le mélange de l’huile et du tensioactif utilisé était biocompatible. en plus, il était possible de détecter la lacz à une telle faible concentration, que les analyses (méta-)génomiques sont envisageables.

Type d'EPrint:Thèse de doctorat
Mots-clés libres:droplet-based microfluidics ; fusion protein ; fluorescence activated droplet sorting ; aminopeptidase ; amino coumarin ; mcherry ; lacz
Sujets:CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 500 Sciences de la nature et mathématiques > 540 Chimie, minéralogie, cristallographie > 547 Chimie organique > 547.7 Macromolécules et composés connexes
Classification Thèses Unistra > Sciences, technologies > Sciences de la nature et mathématiques > 540 Chimie, minéralogie, cristallographie > 547 Chimie organique > 547.7 Macromolécules et composés connexes

CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 500 Sciences de la nature et mathématiques > 540 Chimie, minéralogie, cristallographie > 541 Chimie physique et théorique > 541.3 Chimie physique > 541.35 Photochimie
Classification Thèses Unistra > Sciences, technologies > Sciences de la nature et mathématiques > 540 Chimie, minéralogie, cristallographie > 541 Chimie physique et théorique > 541.3 Chimie physique > 541.35 Photochimie

UNERA Classification UNERA > DISC Discipline UNERA > DISC-20 Physique, chimie, matériaux
UNERA Classification UNERA > ACT Domaine d'activité UNERA > ACT-2 Bio-industries, biotechnologies
CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 600 Technologie (sciences appliquées) > 660 Génie chimique, technologies alimentaires > 660.6 Biotechnologie > 660.63 Génie biochimique
Classification Thèses Unistra > Sciences, technologies > Sciences appliquées > 660 Génie chimique, technologies alimentaires > 660.6 Biotechnologie > 660.63 Génie biochimique
Code ID:1775
Déposé le :16 Mars 2010

Administrateurs de l'archive uniquement : éditer cet enregistrement