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Thèses et Mémoire de l'Université de Strasbourg

Sondes fluorescentes à émission duale pour la caractérisation d’interactions impliquant des protéines : application aux protéines rétrovirales

SHVADCHAK, Volodymyr (2009) Sondes fluorescentes à émission duale pour la caractérisation d’interactions impliquant des protéines : application aux protéines rétrovirales. Thèses de doctorat, Université de Strasbourg.

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Résumé

Dans ce travail, nous avons développé des sondes sensibles à l’environnement pour suivre les interactions de protéines entre elles, avec des acides nucléiques ou avec des membranes. Dans ce but, nous avons développés des fluorophores de la famille des 3-hydroxychromones (3HC) et des 3-hydroxyquinolones (3HQ). Ces sondes présentent à l’état excité une réaction de transfert de proton intramoléculaire (ESIPT) conduisant à deux bandes d’émission, permettant de caractériser les propriétés de cet environnement via le rapport d’intensités de ces deux bandes. La réaction ESIPT des 3HQs s’est révélée être irréversible et sensible à la polarité, à la basicité et la viscosité du milieu, contrairement aux 3HCs qui ne sont pas sensibles à cette basicité et donnent une réponse claire aux modifications de polarité et d’hydratation. Deux sondes ont été couplées au groupement amino-terminal de peptides préparés par synthèse en phase solide. En marquant la protéine de la nucléocapside (NC) de HIV-1 par la 2-furyl-3‑hydroxychromone, une forte baisse, corrélée à la structure du complexe obtenu, du rapport d’intensité des deux bandes est observée lorsque NC se fixe à des oligonucléotides. Cette réponse peut être utilisée pour identifier le site de fixation préférentiel de NC. Cette sonde a également été appliquée avec succès pour suivre l’interaction d’un petit peptide avec son anticorps. Le marquage du domaine C-terminal de la protéine Vpr de HIV-1 avec la 4’-dimethylamino-3‑hydroxyflavone sensible aux milieux apolaires a été utilisé pour déterminer la localisation du peptide lié à une biomembrane et préciser l’affinité du peptide en fonction de la phase et de la composition de la membrane.

Type d'EPrint:Thèse de doctorat
Discipline de la thèse / mémoire / rapport :Sciences du vivant. Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Sujets:CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 500 Sciences de la nature et mathématiques > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 572 Biochimie > 572.8 Génétique biochimique
Classification Thèses Unistra > Santé > Sciences de la vie, biologie, biochimie > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 572 Biochimie > 572.8 Génétique biochimique

UNERA Classification UNERA > ACT Domaine d'activité UNERA > ACT-5 Santé, industrie du médicament, cosmétique
CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 500 Sciences de la nature et mathématiques > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 570.2 Ouvrages divers > 570.28 Techniques, procédés, appareils, équipement
Classification Thèses Unistra > Santé > Sciences de la vie, biologie, biochimie > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 570.2 Ouvrages divers > 570.28 Techniques, procédés, appareils, équipement

CL Classification > DDC Dewey Decimal Classification > 500 Sciences de la nature et mathématiques > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 572 Biochimie > 572.6 Protéines
Classification Thèses Unistra > Santé > Sciences de la vie, biologie, biochimie > 570 Sciences de la vie. Biologie. Biochimie > 572 Biochimie > 572.6 Protéines

UNERA Classification UNERA > DISC Discipline UNERA > DISC-16 Sciences de la vie et de la santé, psychologie
Code ID:1808
Déposé le :04 Juin 2010

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